Co je třeba zvážit při výběru správného mikroskopu pro systém zobrazování živých buněk

Pro úspěšné provádění experimentů se zobrazováním živých buněk je rozhodující použití správného přístupu. Při výběru vhodného mikroskopu pro zobrazování živých buněk je třeba vzít v úvahu následující aspekty: Životaschopnost vzorku, rychlost snímání obrazu (časové rozlišení) a požadované rozlišení ve všech třech rozměrech.

During live cell imaging, certain environmental conditions must be maintained to avoid detrimental physiological changes. In order to capture physiologically relevant cellular dynamics, live cell experiments require specific environmental conditions, including temperature, pH (via CO2), and humidity control. Furthermore, some experiments may even require hypoxic conditions. Modern incubation systems not only tightly control environmental conditions, they can also provide detailed data reports and alert users to temperature, gas, or humidity variations during the course of an imaging experiment. To minimize or avoid the effects of photodamage, getting the right balance between sensitive detection, accurate label separation (if using >1 štítek) a rozhodující je nejnižší dávka světla pro buzení.

Pro experimenty na živých buňkách je často kritická vysoká rychlost získávání, zejména pro studium rychlých dynamických procesů, jako je pozorování vezikul. Použití optických filtrů má za následek omezení rychlosti kvůli nutnosti sekvenčního zobrazování při výměně sad filtrů pro každou barvu, které se používají ke studiu interakce více složek. Postupné shromažďování snímků vyžaduje více času než současné shromažďování snímků a v důsledku toho může dojít k vynechání rychlých pohybů vzorku během získávání, protože každá barva má delší časový interval od jednoho snímku k dalšímu. Navíc, když je podstatné přímé srovnání mezi dvěma nebo více barvami, signály se mohou pohybovat i mezi jednotlivými akvizicemi fluoroforů, což komplikuje interpretaci dat.

K dispozici je několik technologií pro získávání obrázků ve 3 rozměrech v průběhu času. Výběr systému závisí na vašem experimentu a na tom, zda je vaší prioritou při získávání požadovaného 3D rozlišení vyšší rychlost nebo nižší osvětlení vzorku během zobrazování. Výběr nejvhodnějšího systému tradičně vyžaduje, abyste si vybrali mezi kamerovým nebo konfokálním systémem zobrazování živých buněk, avšak moderní řešení mohou poskytovat oba způsoby integrovaným způsobem.